Marcozzi, Cristina (2009) Progettazione, sintesi e studi conformazionali di peptidi attivi sul sistema urochinasi. [Tesi di dottorato] (Unpublished)

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Item Type: Tesi di dottorato
Language: Italiano
Title: Progettazione, sintesi e studi conformazionali di peptidi attivi sul sistema urochinasi
Creators:
CreatorsEmail
Marcozzi, Cristinacristina.marcozzi@unina.it
Date: 30 November 2009
Number of Pages: 120
Institution: Università degli Studi di Napoli Federico II
Department: Chimica farmaceutica e tossicologica
Doctoral School: Scienze farmaceutiche
PHD name: Scienza del farmaco
PHD cycle: 22
PHD Coordinator:
nameemail
D'Auria, Maria Valeriamadauria@unina.it
Tutor:
nameemail
Grieco, Paolopagrieco@unina.it
Date: 30 November 2009
Number of Pages: 120
Uncontrolled Keywords: Urochinasi
MIUR S.S.D.: Area 03 - Scienze chimiche > CHIM/08 - Chimica farmaceutica
Date Deposited: 28 Jul 2010 11:46
Last Modified: 07 Nov 2014 10:11
URI: http://www.fedoa.unina.it/id/eprint/4285

Abstract

L’Urochinasi (uPA) è una proteasi a serina coinvolta in alcuni processi di degradazione e di idrolisi sia in condizioni fisiologiche che patologiche. Esiste una forte correlazione tra l’invasività di alcune forme tumorali ed il livello di espressione di proteasi. Molti tumori umani presentano una incrementata espressione di urochinasi e del suo recettore (uPAR) che è correlata con un aumento dell’invasività del tumore. L’uPA, legandosi al proprio recettore, innesca una interazione ligando dipendente tra l’ uPAR e l’integrina v5, in questo modo può promuovere riarrangiamenti nel citoscheletro e modulare la direzione della migrazione cellulare. L’uPA interagisce con l’integrina v5 anche in maniera diretta attraverso il dominio interno CP (Connecting Peptide). L’attività di ricerca è stata incentrata sulla sintesi di polipeptidi correlati con l’urochinasi, al fine di valutare l’attività migratoria indotta su cellule umane embrionali di rene (HEK-293). Le sequenze aminoacidiche dei peptidi sintetizzati, sono derivate dal dominio CP dell’urochinasi umana: in particolare sono stati sintetizzati il polipeptide CPp, corrispondente alla sequenza del CP dell’urochinasi umana, e alcuni derivati di quest’ultimo progettati al fine di definire la minima sequenza attiva. E’ stata inoltre presa in considerazione l’importanza del residuo amminoacidico Ser138 che, assieme al residuo di Ser303 dell’uPA, può essere sottoposto a fosforilazione. Tale modifica post-traduzionale non altera l’affinità per il recettore, ma modifica la risposta biologica producendo inibizione della migrazione cellulare. Sono stati quindi sintetizzati peptidi caratterizzati dalla sostituzione puntiforme del residuo di Ser138, con residui amminoacidici a catena laterale con carica negativa, al fine di valutare l’attività inibitoria della migrazione, nonché l’importanza della carica negativa per la strutturazione del peptide. Il lavoro di sintesi è stato effettuato utilizzando la strategia sintetica in fase solida secondo la classica strategia via-Fmoc. Alla sintesi è seguita la relativa purificazione dei prodotti, tramite RP-HPLC preparativo con caratterizzazione mediante RP-HPLC analitico e spettrometria di massa ESI o MALDI. Sui composti più interessanti da un punto di vista farmacologico, è stata effettuata l’analisi conformazionale mediante tecniche CD ed NMR.

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